ちくり

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978: 名無し [] 2021/08/04(水) 01:24:35.16 ID:whiiPZwq0

誰にでも分かるように説明いたします。
生物はDNAを持ち、そこからRNAを作り、RNAからたんぱく質を作ります。
弊社では誰も遺伝子定量が分からないようですので、RNAの１つ先の「たんぱく質の定量」を考えてみます。
ELISAという測定を行います。目的たんぱく質にくっつく試薬を使って光らせ、光を測定するだけです。Wikipediaでも見てください
吸光度測定なので結果は対数、Logになります。
さて、この測定で検量線も引かず、サンプルを入れて「測定できた！」と主張する人が世の中にいますか？いません

やったことあれば分かりますが、まったく同じ検量線でさえ、測定のたびにけっこう違う値を出します。その結果の対数です。とてもばらつくので検量線を引いていない結果など何の意味もありません。
自然界には存在しない低分子化合物をHPLCやLC-MS/MSで決まった手順で測定するわけではないのです。生物が相手なのでその程度の揺らぎはあります。自分の口からでた小さな飛沫でも測定に影響します。繰り返しますが、低分子化合物の測定ではないのです。
目的蛋白にくっつく試薬も測定対象によって変えます。試験系を1から作っているのと同じです。なのに試験系の確認もしませんか？
そもそも、生体因子相手の定量で、検量線を引かないこと自体がありえないのです。定量ってなんですか？

私の経験上、遺伝子定量PCRは、検量線を引けばELISAよりも正確です。PCRという名前の通り何度も特定の遺伝子を増幅させ続ける反応だからです。検量線を引かなければELISA以上に意味不明なむちゃくちゃにバラつきまくる数値です。PCRという名前の通り何度も特定の遺伝子を増幅させ続ける反応だからです。
測定原理のせいで対数になるELISAと違い、測定の前、反応原理自体が指数増幅反応、対数だからです。Wikipediaでも見てください

なぜそんな測定で検量線も引いていない、測定範囲にサンプルが入っているかも分からない結果を宮下さんは正しいと主張しますか？僕を批判し続け追い出しましたか？
彼が大学時代の研究論文をその方法で行い発表してしまったからです。この会社は宮下さんの大学時代の研究の続きに私が知る限りでも既に400万円以上かけていますが、本当にただの無駄金でしょう。なんの科学的な結果も伴わないからです。
宮下さんが僕の嘘の悪口を広め続けて、僕を阻害し続けたのも、これが理由です。では、そんな明らかな間違いになぜ安全性Gの人たちは乗っかり続けましたか？

昔、Livakという人がいました。彼は「検量線を引かないPCRを開発した！」と論文を書き始めました。ところが図１で「前提条件として5回検量線引いてね」と書いています。つまり5回測定して安定だったら、その後はいらないんじゃない？という主張で、ddCt法と呼ばれます。
でも同じ遺伝子をルーティンで測り続ける生物研究者など居ませんので、病院の臨床検査室以外でこんな方法は何の役にも立ちません。またすぐにPaffleという人に批判されたように、5回検量線引いたならその数値で補正しなさい、などごく当たり前の問題点を孕んでいます。今ではLivakは相手にもされません。でも安全性GはLivakのやっている「5回の検量線測定」すらやらない独自法ですのでそれ以下です。サルです。

http://lavender.5ch.net/test/read.cgi/company/1252597238/978

979: 名無し [] 2021/08/04(水) 01:25:25.33 ID:whiiPZwq0

今日は1点だけに絞ります。
＊＊＊＊＊＊＊
・宮下さんの主張する「検量線を引かない遺伝子定量方法」について世界中見渡しても論文根拠さえありませんが、
　科研製薬は「検量線を引く片岡がおかしい」と私の人事考課を3年間下げ続け、根地島さんは怒号罵声をあげて詰め続け、人事部は今でも訂正さえせず、家田本部長は最終的に僕を研究部門から追い出す理由にさえしました。
＊＊＊＊＊＊＊

もっと簡単に説明します
Googleを開いてください。「検量線を引かないPCR法」と打ち込んで、検索を押してください。
https://www.thermofisher.com/blog/learning-at-the-bench/qpcr-basic7/という2015年に書かれたページが一番上に出ます。中身を読みましょう。ひたすら「増幅効率」というものを「検量線を引いて」求めています。
「検量線を引かないPCR法」で検索したにも関わらずです。分かりましたか？検量線を引かないPCRなどないのです。
以上です。

そしてこの試薬会社のページはなぜ「検量線を引かないPCR法」で検索して引っかかりましたか？
「検量線を引かないPCR法（ddCt）」という言葉が本文中にあるからです。でも上で述べたようにddCt法の開発者Livakはその論文中で「前提条件、検量線5回引けよ」と述べています。この文章は明らかに間違いです。

試薬会社が試薬を沢山売るために書いてしまった「検量線を引かないPCR法（ddCt）」。この言葉が日本では独り歩きして一時期ひどい研究発表がたくさん出ました。宮下さんの出身研究室がいい例です。
そこで2013年にMIQE、「定量的リアルタイムPCR実験の公表に必要な最低限の情報」というガイドラインができます。世の中の研究報告が酷すぎたからです。
https://www.gene-quantification.de/miqe-japanese-version-2013.pdf
読めば分かります。MIQEは「検量線の結果」を必ず報告しろと述べています。宮下法は論文根拠もなければ「定量的リアルタイムPCR実験の公表に必要な最低限の情報」もありません。そもそも彼がやっているのはPCRですらないので当然ですが。

http://lavender.5ch.net/test/read.cgi/company/1252597238/979

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